高质量的重组蛋白是研究工作和药物开发的重要起始材料。重组蛋白质量的关键属性包括纯度、寡聚状态、热稳定性和化学稳定性、折叠、翻译后修饰(PTM)、活性……由于蛋白质本身的复杂性,蛋白质表达和纯化往往具有挑战性。蛋白质的某些序列或结构特征可能影响重组蛋白产品的产量和稳定性。
基于HEK293细胞,通过PCR方法合成抗体/蛋白序列库,然后将靶基因转移至HEK293中进行表达。对纯化的抗体/蛋白进行质量和活性分析,并将合适的候选物进行扩大生产。该系统使用烧瓶作为初始培养方法,根据每次培养的体积,每周可产生100~200个分子。
高通量完成目的基因合成,克隆到细胞表达载体中
将表达载体转染到哺乳动物细胞中表达目的蛋白
裂解细胞,通过亲和层析纯化重组目的蛋白
通过SDS-PAGE和HPLC检测目的蛋白纯度和均一性